۳-۳-روش انجام طرح………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۳۸
۳-۳-۱-مواد وتجهیزات……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۳۸
عنوان صفحه

۳-۳-۱-۱-دستگاه ها و وسایل مورد نیاز…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۳۸
۳-۳-۱-۲-مواد مصرفی مورد نیاز………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۴۱
۳-۳-۱-۳-محیط های کشت مورد استفاده………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۴۱
۳-۴-ترکیبات و محلول های مورد استفاده در تحقیق و فرمول ساخت آنها……………………………………………………………………………………………..۴۱
۳-۵-روش اجرا…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۴۳
۳-۵-۱-جمع آوری اطلاعات………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۴۳
۳-۵-۲-انجام امور باکتریولوژیک……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۴۳
۳-۵-۳-نمونه برداری، کشت، جداسازی و تعیین هویت باکتری ها……………………………………………………………………………………………………………۴۳
۳-۵-۳-۱-نمونه برداری………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۴۳
۳-۵-۳-۲-طرز تهییه محیط های کشت………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۴۳
۳-۵-۳-۳-نگه داری نمونه های عفونت ادراری………………………………………………………………………………………………………………………………………………۴۵
۳-۵-۳-۴-نگه داری سویه باکتری………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۴۵
۳-۵-۴-استخراج، تعیین کمیت و کیفیت DNA……………………………………………………………………………………………………………………………………………….46
۳-۵-۴-۱-استخراج DNA……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..46
۳-۵-۴-۲-کمیت سنجی و غلظت سنجی DNA استخراج شده…………………………………………………………………………………………………………………..۴۶
۳-۵-۵-انجام آزمایشات مولکولی…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۴۷
۳-۵-۵-۱-پرایمرها……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۴۷
۳-۵-۵-۲-رقیق سازی پرایمرها…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۴۹
۳-۵-۶-انجام PCR…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..49
۳-۵-۶-۱-بهینه سازی اجزاء واکنش PCR………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..50
۳-۵-۶-۲-بهینه سازی تهیه Master Mix ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….50
۳-۵-۷-گرادیانت دمایی جهت به دست آوردن دمای اتصال برای ژن aer ………………………………………………………………………………………………50

۳-۵-۷-۱-گرادیانت دمایی جهت به دست آوردن دمای اتصال برای ژن HlyA…………………………………………………………………………………..51
۳-۵-۷-۲- گرادیانت دمایی جهت به دست آوردن دمای اتصال برای ژن Pap ……………………………………………………………………………………..51
۳-۵-۷-۳- گرادیانت دمایی جهت به دست آوردن دمای اتصال برای ژن Cnf ………………………………………………………………………………… 52
۳-۵-۷-۴- گرادیانت دمایی جهت به دست آوردن دمای اتصال برای ژن Afa ………………………………………………………………………………….. 53
۳-۵-۷-۵-گرادیانت دمایی جهت به دست آوردن دمای اتصال برای ژنFim ………………………………………………………………………………… 53
۳-۶-مراحل انجام PCR …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………54
۳-۶-۱-بهینه سازی PCR ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………54
۳-۶-۲-بررسی محصول PCR……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….55
۳-۷-مواد مورد نیاز برای انجام الکتروفورز………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۵۶
۳-۷-۱-ژل آگارز………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۵۶
عنوان صفحه

۳-۷-۱-۱-طرز تهییه ژل آگارز…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۵۶
۳-۷-۱-۳-بافر سنگین کننده…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۵۶
۳-۷-۱-۴-رنگ آمیزی ژل…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۵۷
۳-۸-توالی یابی…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۵۷
۳-۹-۱-روش گردآوری اطلاعات……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۵۷
۳-۹-۲-روش تجزیه و تحلیل اطلاعات…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۵۸
فصل چهارم: نتایج و بحث
۴-۱-فراوانی بیماران بر اساس جنس…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۵۹
۴-۲-نتایج مربوط به فراوانی فاکتورهای حدت در اشرشیا کلی…………………………………………………………………………………………………………………..۶۰
۴-۳-نتایج آزمون PCR برای شناسایی ژن آئروباکتین در سویه های واجد اشرشیا کلی یوروپاتوژن………………………………………………..۶۱
۴-۳-۱-بهینه سازی دمای اتصال………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۶۱
۴-۳-۱-۱-انجام آزمون روی سایر ایزوله ها…………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۶۲
۴-۳-۲-نتایج آزمون PCR برای شناسایی ژن سایتوتوکسیک نکروز دهنده در سویه های واجد اشرشیا کلی یوروپاتوژن………..۶۴
۴-۳-۲-۱- بهینه سازی دمای اتصال…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۶۴
۴-۳-۲-۲- انجام آزمون روی سایر ایزوله ها…………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۶۴
۴-۳-۳- نتایج آزمون PCR برای شناسایی ژن همولیزین در سویه های واجد اشرشیا کلی یوروپاتوژن…………………………………………..۶۵