شکل۱-۱۲: جهش های BRAF یافته شده در سرطان ملانوما:طرح شماتیک از ساختار ابتدایی B-RAF که دمین های عملکردی و موقعیت ۳۲ موارد مشاهده شده در سرطان ها در ژن B-RAF را نشان می دهد. جایگزینی های اسید آمینه های ایجاد شده را براساس میزان فعالیت آن ها به صورت رنگی نشان داده اند(۳۲)
۱ـ ۶ اهداف تحقیق شامل اهداف اصلی، جانبی، کاربردی.
۱ـ۶ـ ۱ هدف اصلی:
بررسی ارتباط بین پلی مورفیسم شایع جهش (V600E) در ژن B RAF و ابتلا به میوم
۱ـ ۶ـ۲ هدف جانبی:
بررسی میزان شیوع جهش V600 E در ژن B RAF در افراد مبتلا به میوم وافراد نرمال
۱ـ ۶ـ ۳ هدف کاربردی:
استفاده از نتایج به دست آمده در شناسایی مارکرهای مولکولی تشخیصی میوم
۱ـ۷ فرضیه ها:
جهش در کدون ۶۰۰ (V600E) در ژن B RAF با ابتلاء به میوم ارتباط معنی دار دارد.
۱ـ۸ ضرورت های خاص :
شیوع بالای ابتلاء به میوم و ارتباط آن با ابتلاء به سرطانهای زنان نیاز به غربالگری زود هنگام میوم در افراد پرخطر را ضروری ساخته و در این راستا نیازمند مارکرهای گویا می باشیم.
۱-۱۳ تعریف واژه ها و اصطلاحات فنی و تخصصی
میوم : یک تومور خوش خیم رحمی است که از سلول های عضله صاف رحم بوجود می آید.
پلی مورفیسم : هرگاه جایگاه فروانترین الل آن در جمعیت از ۹۹ درصد کمتر باشد پلی مورفیسم گفته می شود . هرگاه فراوانی جابجایی از ۹۹ درصد کمتر باشد آن را مونوفورمیک می نامند.پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی (single – nucleotid polymorphism) شایعترین اشکال جابجایی تک نوکلئوتیدی (A, G, C, T) در ژنوم بین افراد یک گونه ی بیولوژیکی ، یا بین یک جفت کروموزوم در یک فرد،این نوکلئوتید فرق دارد.دریک جمعیت می توان یک فرکانس آلل حداقل به SNP ها نسبت داد.( کمترین فرکانس الل در یک لوکوس که در یک جمعیت خاصی مشاهده شده است).
منوراژی : خونریزی قاعدگی شدید و طولانی مدت را منوراژی می گویند.
دیسمنوره : احساس درد غیر معمول در قسمت شکم هنگام قاعدگی را دیسمنوره می گویند.
Haematometra:تجمع خون در رحم
Multipara :
خانمی که سابقه دو یا چند بار حاملگی به همراه جنین زنده داشته ، خواه بچه موقع تولد زنده بوده یا نبوده است .
Microsatellite instability :
نوعی جهش ژنی در قسمت هایی از DNA که خود مسئول تعمیر DNA هستند.این نواحی ژنی که بنام میکروستالیت نامیده می شوند با این جهش ها کوتاهتر یا بلندتر شده یا توالی بازهایشان تغییر می کند.به این پدیده ناپایداری میکروستالیت می گویند.
CpG island methylation :
جزایر CG نواحی کوتاهی از DNA هستند که توالی های C و G (ستیوزین و گوانین ) در آنها با فرکانس زیادی نسبت به سایر نواحی وجود دارد.همچنین به آن CpG island نیز می گویندکه p نشانه پیوند فسفودی استری است که دونوکلئوتید را به هم وصل می کند.جزایر CG غالباً اطراف نواحی پروموتور ژنهای housekeeping(ژنهای housekeepiny ژنهایی حیاتی هستندکه در اعمال عمومی سلول نقش دارند) یا سایر ژنهای که زیاد در سلول فعال هستند، قرار دارد.در این توالی های CG متیله شده، دیده نمی شود.برعکس در توالیهایی از CG که درنواحی ژنهایی غیر فعال قرار دارند معمولاً متیلاسیون صورت گرفته است که این کار برای خاموش کردن ژنهایی مورد نظر می باشد.

هایپرمتیلیشن :
با افزایش متیلشین ناحیۀ CpG در ژنهای خاموش کنندۀ تومور، از فعالیت این ژنها در سرکوب تشکیل تومور کاسته می شود به همین علت متیلاسیون ژنهای مربوط را به عنوان مارکر شناسایی سرطان کولون معرفی می کنند.
BRAF gene :
این ژن پروتئینی بنام B-Raf proto-oncogene serine/ threonine- protein kinase یا B-RAF را کد می کند که مسئول فرستادن پیام به سلولها و رشد سلولی است.گاهی در ژن BRAF جهش اتفاق می افتدوپروتئین BRAF را تغییر می دهد.این تغییر ژنی که از طریق والدین می تواند منتقل شود باعث نقص های جنینی
می گردد و یا به صورت یک جهش پنهان (oncogene) در بزرگسالی باعث سرطان می شود.
فصل دوم:
مروری بر متون گذشته
مطالعات نشان می دهد که B RAFیک سرین ترئونین کینـاز است که به مسیرRAS/RAF/MEK/ERK/MAPk
تعلق دارد و در هدایت سیگنال های تحریک کننده ی تقسیم میتوز از غشاء سلول به هسته مؤثر است. RASوقتی که به GDP متصل است غیرفعال می شود ولی اگر بهGTP متصل شود فعال می شود وشروع به فسفریلاسیون و فعال کردن ژن B-RAFو فعال سازی مسیرهای سیگنالی می کند.این مسیرهای کینازی در اغلب سرطان های انسانی تحت تاثیرقرارگرفته است.بیش از۹۰%جهش های B RAF باعثِ جایگزین بازی A به جای Tدرنوکلئوتید ۱۷۹۶ می شودکه باعث تبدیل والین به گلوتامیک اسید درموقعیت ۶۰۰می شود (E600V).
جهش V600E در B RAFبه میزان بسیارزیادی درتخمدان (%۳۰~),تیروئید (%۳۰~) وسرطان های کلورکتال (%۱۵~) (۱۸) ریه وملانوما دیده شده است.درمعرض UV قرارگرفتن به تنهایی نمی تواندعامل جهش باشد.جهش V600E درتومورهای کبد موش به وسیله نیتروزدی اتیل آمین تحریک می شود.بیشترین میزان شیوع جهش های B RAF درتومورهای بدخیم ملانوما(۷۰%-۲۷%) سرطان پاپیلاری تیروئید(۵۳%-۳۶%)وسرطان کلون (۲۲%-۵%)وسرطان تخمدان (%۳۰~) همچنین درفرکانس پایین تری دربقیه سرطان ها(۳%-۱%)وجوددارد.
جهش BRAF باعث فعالسازیERKو این باعث تحریک تبدیل G1/Sدرتنظیم چرخه سلول می شود(۱۶). BRAFبه عنوان یک انکوژن مهم درسرطان های انسانی مطرح است.
جهش نقطه ای سوماتیک درژن BRAF برای اولین باردرسال ۲۰۰۲گزارش شدومشخص شد که تقریبا"در۸%سرطان های انسانی وجود دارد.
در سال۲۰۰۲به وسیله ی دیویس وهمکارانش جهش های نابجای سوماتیک در۶۶% از ملانوماهای بدخیم وبه میزان کمتری در گستره ی وسیعی از سرطان های انسانی مشخص شد.
در سال۲۰۰۲به وسیله ی راجاگو پالان و همکارانش مشخص شد که به طور منظمی جهش درB-RAF وKRASدر ۳۳۰تومور کلورکتال زیاد شد.
در سال ۲۰۰۲ به وسیله ی دیویس و همکارانش یک جابه جایی در نوکلئوتید A-T 1799 در اگزون شماره ۱۵ ژن BRAF یافت شد که این جابه جایی منجر به جانشینی والین در موقعیت ۶۰۰ به اسید گلوتامیک می شد. این جهش برای ۹۲% از جهش های BRAF در ملانومای بدخیم محاسبه شد. جهش V600E یک جهش فعال کننده است که به فعال شدن BRAF در مسیرهای آبشاری سیگنالی مسیر MAP کیناز می شود.
در سال ۲۰۰۳ به وسیله ی بروس وهمکارانش جهش B RAF در ۵ مورد از۱۷۹ جهش های مورد سرطان ریه سلول بزرگ و۲۲ مورد از ۳۵ مورد ملا نوما مشخص شد.
در سال ۲۰۰۹ به وسیله ی یو وهمکارانش مشخص شدکه ۴۲ (۶۰%)مورد از ۷۰مورد آستروسیتوماهای پلی کیستی تک گیر، نو آرایی هایی در ژن B RAF دارند.میزان بالای جهش های B RAF درملانوماوفقدان درمان های موثربرای مراحل پیشرفته این بیماری پیشنهادمی کندکه ممانعت ازفعالیت B RAF استراتژی جدید مهمی برای درمان سرطان ملانومای جهش یافته است.
در سال ۲۰۱۰ به وسیله ی فلاحرتی و همکارانش رگرسیون کاملی ازجهش V600E در ارتباط با ملانومای متاستاتیک در ۸۱% از بیماران که با مهار کننده ی مخصوص به جهش V600E تحت درمان قرار گرفته بودند رسم شد.در بین این ۱۶ بیمار که تحت دز تشدیدی قرار گرفته بودند، ۱۰ مورد پاسخ جزئی داشتند و یک مورد کامل داشتند.در یک گروه ۳۲ نفری، ۲۴ مورد یک پاسخ جزئی داشتند و دو مورد پاسخ کامل داشتند.
در سال ۲۰۱۱به وسیله ی پولیکاکوس وهمکارانش سیستم مقاومتی جدیدی برای ملانومای که جهش B RAF(E600V ) دارند و با ممانعت کننده های RAFتیمار شده بودند پیدا شد.
کیم و همکارانش در سال ۲۰۰۳ بیان کردند که شایع ترین جهش V600E, BRAF در سرطان هایی که در ژن KRAS را دارند وجود ندارد.آن ها میزان وقوع جهش BRAF را در سرطان های معده و ارتباط بین جهش های KRAS, BRAF رادر این سرطان مطالعه کردند.آن ها ۷ جهش نابه جای KRAS را در ۶۶ سرطان معده و رده ی سلولی سرطان معده یافتند ولی هیچ جهش در BRAF در آن ها یافت نشد.